Control biológico de Rhicephalus (Boophilus) microplus con hongos entomopatógenos

Biological Control of Rhicephalus (Boophilus) microplus with Entomopathogenic Fungi

Controle biológico de Rhicephalus (Boophilus) microplus com fungos entomopatogênicos

Arely Bautista Gálvez
Escuela Maya de Estudios Agropecuarios de  Universidad Autónoma de Chiapas, México
arelygalvez@hotmail.com

Rafael Pimentel Segura
Escuela Maya de Estudios Agropecuarios de Universidad Autónoma de Chiapas, México
rafaelpimentel_20_10@hotmail.com

Armando Gómez-Vázquez
División Académica de Ciencias Agropecuarias, Universidad Juárez Autónoma de Tabasco, México
armandoujat@outlook.com

Resumen
En México el problema principal de la ganadería bovina, en lo particular en el trópico, es controlar las garrapatas Rhicephalus (Boophilus) microplus, ya que el uso inadecuado de los tratamientos químicos ha creado resistencia en esos parásitos. El control biológico en garrapatas es un concepto nuevo y ha sido una medida efectiva, que ha permitido mantener estas dentro de parámetros económicos y zoosanitarios aceptables. Una de las posibilidades reales en este campo para controlar garrapatas Rhicephalus (Boophilus) microplus de importancia pecuaria es el uso de hongos entomopatógenos como el Metharrizium anisopliae y Beauveria bassiana. La finalidad del presente estudio fue observar la capacidad patógena de dos cepas de Metarhizium anisopliae a dosis de 1X108 conidias/ml y 1.3X1012 conidias/ml, y de una cepa de Beauveria bassiana a una dosis de 1.3X1012 conidias/ml en unidades de producción en bovinos de doble propósito, en los municipios de Emiliano Zapata Tabasco y la Cuenca Lechera de Catazajá, Chiapas, México; directamente en campo. Se presentó una respuesta binomial negativa de mayor porcentaje de patogenicidad en las dosis de 1.3X1012 conidias/ml de Beauveria bassiana con 76.66% a los 37.3 días de haber sido inoculada la garrapata, en contraste con las dos cepas de Metarhizium anisopliae, que mostraron una patogenicidad de 47.71% a los 10 días con la dosis 1X108 conidias/ml y de 37.75% a los 44.5 días con la dosis 1.3X1012 conidias/ml. Se presentó interacción entre tratamiento y tiempo. Por tanto, se concluye que el uso de los hongos entomopatógenos son una alternativa para el control de garrapatas adultas en el sureste de México.

Palabras clave: Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana, garrapata, bovino.

Abstract
In Mexico, the main problem of bovine cattle breeding, particularly in the tropics, is to control the ticks Rhicephalus (Boophilus) microplus, since inappropriate use of chemical treatments has created resistance in these parasites. Biological control in ticks is a new concept and has been an effective measure, which has allowed to keep these within acceptable economic and animal sanitary parameters. One of the real possibilities in this field to control ticks Rhicephalus (Boophilus) microplus of animal importance is the use of entomopathogenic fungi such as Metharrizium anisopliae and Beauveria bassiana. The aim of the present study was to observe the pathogenic capacity of two strains of Metarhizium anisopliae at doses of 1X108 conidia/ml and 1.3X1012 conidia/ml and of a strain of Beauveria bassiana at a dose of 1.3X1012 conidia/ml in production units In dual purpose cattle, in the municipalities of Emiliano Zapata Tabasco and the Cuenca Lechera de Catazajá, Chiapas, Mexico; Directly in the field. A negative binomial response with a higher percentage of pathogenicity was observed at the doses of 1.3X1012 conidia/ml of Beauveria bassiana with 76.66% at 37.3 days after the tick was inoculated, in contrast to the two strains of Metarhizium anisopliae, which showed a Patogenicity of 47.71% at 10 days with the dose 1X108 conidia/ml and 37.75% at 44.5 days with the dose 1.3X1012 conidia/ml. Interaction between treatment and time was presented. Therefore, it is concluded that the use of entomopathogenic fungi are an alternative for the control of adult ticks in southeastern Mexico.

Key words: Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana, tick, bovine.

Resumo
No México o principal problema de gado, em especial, nos trópicos, é controlar Rhicephalus (Boophilus) microplus carrapatos, como o uso indevido de tratamentos químicos criou resistência em estes parasitas. O controle biológico nos carrapatos é um conceito novo e tem sido uma medida efetiva, que permitiu mantê-los dentro de parâmetros econômicos e de saúde animal aceitáveis. Uma das possibilidades reais neste campo para Rhicephalus carrapatos (Boophilus) microplus importância gado é o uso de fungos entomopatogicos tais como Beauveria bassiana e Metharrizium anisopliae. O objectivo deste estudo foi observar a patogenicidade de duas doses Metarhizium anisopliae de 1x108 / ml e 1.3X1012 conídios / ml, e uma estirpe de Beauveria bassiana a uma dose de 1.3X1012 conídios / ml em unidades de produção gado de duplo propósito, nos municípios de Emiliano Zapata Tabasco e Catazajá Cuenca Lechera, Chiapas, México; diretamente no campo. Mostrou uma resposta binomial negativo maior percentagem de patogenicidade em doses 1.3X1012 conídios / ml de Beauveria bassiana com 76.66% para 37,3 dias de carrapato inoculado, em contraste com as duas estirpes de Metarhizium anisopliae, que eles mostraram patogenicidade 47,71% em 10 dias com a dose de 1x108 conídios / ml e 37,75% para 44,5 dias com uma dose 1.3X1012 conídios / ml. Interação entre tratamento e tempo foi apresentada. Portanto, conclui-se que o uso de fungos entomopatogênicos é uma alternativa para o controle de carrapatos adultos no sudeste do México.

Palavras-chave: Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana, carrapato, bovino.

Fecha recepción: Enero 2017                                     Fecha aceptación: Mayo 2017

Introducción

Las garrapatas afectan notablemente la ganadería extensiva e inclusive ponen en riesgo la salud del ser humano de manera directa o por inoculación de organismos patógenos (Álvarez, 2007). Existen patologías que las garrapatas pueden transmitir al hombre aun cuando no sea su hospedador habitual. El Boletín de alertas epidemiológicas internacionales menciona algunas: Enfermedad de Lyme, Fiebre Recurrente, Fiebres por rickettsias, Ehrlichiosis Anaplasmosis, Tularemia Babesiosis, Encefalitis por virus, Fiebre de Colorado, entre otras (Quiroz, 2007). En las zonas tropicales hay varios tipos de garrapatas; en México se han identificado 77 especies de garrapatas que afectan al ganado bovino y al hombre (Rodríguez-Vivas et al.,2006); la distribución geográfica de las especies de garrapatas en México depende de factores ambientales, por ejemplo, la humedad relativa, la temperatura y la vegetación. Otros factores son la altitud, la presencia y abundancia de hospederos y las prácticas de control o erradicación que el hombre ejerce sobre las poblaciones de garrapatas (Rodríguez-Vivas et al., 2006; Estrada- Peña et al., 2006).

En la ganadería bovina nacional se identifican las siguientes especies de garrapatas: Boophilus microplus, B. anulatus, Amblyomma cajennense, A. imitador. A. maculatum, A. triste, A. americanum y Anocentor nitens; sin embargo, las especies de mayor importancia para el ganado bovino en México son B. microplus y A. cajennense (Rodríguez-Vivas et al.,2006). El área de distribución de la Rhipicephalus (Boophilus) microplus abarca zonas tropicales, templadas y áridas; en conjunto se considera que cubre 1 043 772 km2, lo que representa 53.0% del territorio nacional. La dinámica poblacional de Rhipicephalus (Boophilus) microplus en los estados de Chiapas y Tabasco se presenta durante todo el año, pero en invierno se estima que puede vivir hasta 51 días a pesar de las condiciones climáticas (Cortes et al., 2010). La garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus es el ectoparásito que produce mayores pérdidas económicas en el trópico y subtrópico mexicano, debido a los altos costos asociados a su control y a las enfermedades que transmite (Rodríguez-Vivas et al., 2005).
Los medios para el control de la garrapata son diversos ixodicidas, como los arsenicales, organoclorados, organofosforados, carbamatos, formamidas, piretroides sintéticos (flumetrina), lactonas acrocíclicas (eprinomectina), fenilpirazoles (fipronil), así como algunos reguladores del crecimiento como los análogos de la hormona juvenil (metopreno y fenoxicarb) y los inhibidores de la síntesis de quitina, como el fluazurón, diflubenzurón, lufenurón y la ciromazina (Cordero et al., 1999; Cuore et al., 2008 y Rodríguez et al., 2010). Los ixodicidas han sido utilizados con buenos resultados en el control de las garrapatas, sin embargo, su uso continuo e irracional ha generado cepas resistentes, como sucede en la región de la Cuenca Lechera de Catazajá (CLC), Chiapas y Tabasco, que desde el año 2001 se identificó la resistencia a los amidinas (AM) en el municipio de Emiliano Zapata, Tabasco y en los estados de Chiapas, Yucatán y Quintana Roo, ya que el 88% de los hatos ganaderos son resistentes a los piretroides (PS) y organofosforados (OF) (Fuentes, 2011; Araque, A et al., 2014), por lo que los productores han venido incrementando el número de aplicaciones de productos químicos (SENASICA) en periodos que van desde los 8 a 21 días, por lo que los altos costos de producción se incrementan (Monroy et al.,2016), la demanda de alimentos libres de residuos químicos y el cuidado al ambiente han propiciado la necesidad de buscar alternativas no químicas para el control de garrapatas, basado en el uso de hongos entomopatógenos que han demostrado ser eficaces para el control de varios géneros de estos parásitos, entre los que se encuentran Amblyomma y Rhipicephalus. Las especies de hongos entomopatógenos que han demostrado eficacia contra las garrapatas son Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Isaria farinosa (=Paecilomyces farinosus) y Lecanicillium lecanii (=Verticillium lecanii), siendo B. bassiana y M. anisopliae las especies más estudiadas y de mayor eficacia (Fernandes y Bittencourt, 2008; Arguedas et al., 2008; López et al., 2009; Fernández et al., 2005, 2010, 2012; Ojeda-Chi et al., 2011; Motta et al., 2011; Bautista et al.,2012;Éverton K.K et al.,2012; Rodríguez et al., 2014; Díaz et al., 2014; Rodríguez-Vivas et al.,2014; Moncada et al., 2015; Pulido et al., 2015; Valverde et al., 2015; Tinajero et al., 2016;). Por anteriorobjetivo del presente estudio fue evaluar la capacidad patógena de los hongos entomopatógenos de M. anisopliae y B. bassiana en garrapatas Rhicephalus (Boophilus) microplus en estado adulto, en hatos de bovinos de doble propósito en las regiones de los Ríos de Tabasco y la Cuenca Lechera de Catazajá, Chiapas, México, partiendo que los hongos entomopatógenos reducen de manera paulatina la infestación de la garrapata Rhicephalus (Boophilus) microplus en el trópico y de esa manera reducir el uso de agroquímicos que utilizan los productores para su control.

Materiales y métodos
Caracterización de las Unidades de Producción de Bovinos de Doble Propósito
Para la selección de las unidades experimentales, se tomó previamente una muestra constituida por 62 ganaderos activos cooperantes de las comunidades de Agua Fría, Punta Arena, Chiapas y Emiliano Zapata, en Tabasco. Ello permitió captar la variabilidad de condiciones y las características de los sistemas de producción de leche bovina. Para clasificar y analizar los sistemas de producción bovina se obtuvo información a través de la técnica de entrevista informal semi-estructurada (Gillham, 2005), y además se hicieron observaciones directas en campo. Se aplicó un cuestionario que generó una serie de indicadores que fueron agrupados de la siguiente manera: Tamaño del hato (UA), Tasa de natalidad (%), Tasa de mortalidad en crías (%), Tasa de mortalidad en adultos (%), Becerros destetados (%), Carga animal (UA/ha), Grado de control de enfermedades (%), Nivel de uso de equipo manual (%), Nivel de uso de equipo mecanizado (%), Característica de la infraestructura (%), Número de vacas por semental (n), Característica de alojamientos e instalaciones de la unidad de producción (%), Medios de trabajo (%). Los valores promedio de los indicadores y las variables se examinaron estadísticamente en el programa Statistical Package for Social System (SPSS 2012), versión 22.0.

Ensayos en campo
El ensayo se realizó en cuatro unidades de producción en bovinos de doble propósito, provenientes de la Cuenca Lechera de Catazajá, localizada al norte del estado de Chiapas, México; en los paralelos 17° 12´ y 17° 57´ latitud norte, los meridianos 91° 46´ y 92° 12´ latitud oeste; altitud entre 0 y 10 msnm, colindante al norte, al este y al oeste con el estado de Tabasco y el municipio de Palenque, y al sur con el municipio de Palenque (INEGI, 2010), y una unidad de producción en bovinos de doble propósito en el municipio de Emiliano Zapata, Tabasco.

Se seleccionaron cinco bovinos al azar, adultos con peso promedio de 450 kg vivo, en condiciones al libre pastoreo con rotación de potreros, alimentados con Grama natural (Paspalum notatum). Es importante mencionar que cuatro semanas antes del estudio se les aplicó AmitrazMR mediante aspersión en dosis de 2 ml L-1 de agua. Para llevar a cabo las aplicaciones en las pruebas de campo, previamente se seleccionaron dos cepas del hongo M. anisopliae y una cepa de B. bassiana. Los resultados en laboratorio demostraron una mayor patogenicidad en garrapatas en estado adulto.

Enseguida, se hizo el conteo de garrapatas adultas en los bovinos previo a la aplicación. Se tomaron como criterio las garrapatas de más de 4 mm de longitud, presentes en 20 cm2 de piel en seis áreas predeterminadas (tabla de cuellos por ambos lados, las dos ingles o entrepiernas y ambas axilas de los miembros anteriores), para lo cual se utilizó un acarómetro (Bazán, 2002; Neira et al., 2008; Balladares et al., 2014), que consistió en una hoja de acetato con una ranura rectangular de 2 cm de ancho por 10 cm de longitud (20 cm2).
Los tratamientos consistieron de dos cepas de Metarhizium anisopliae evaluando una cepa nativa MM01 a una concentración de 1X10⁸ conidias/ml, proporcionada por el Laboratorio de Biotecnología de la Escuela Maya de Estudios Agropecuarios de la Universidad Autónoma de Chiapas, una cepa comercial a una concentración de 1.3X1012 conidias/ml y una cepa de Beauveria bassiana a la concentración de 1.3x1012 conidias/ml, proporcionadas por el laboratorio Tiemelonlá Nich Klum de Palenque, Chiapas; a dichas cepas evaluadas al momento de aplicar a los bovinos se les agregó un adherente que consistió en TweenMR 20 al 0.03%, también se evaluaron un tratamiento químico (AmitrazMR) a la dosis comercial recomendada por el laboratorio de 2 ml L-1 de agua y otro tratamiento que sirvió como control utilizando solamente agua de 2.5 litros por animal, la misma cantidad que en los grupos anteriores.
Antes de iniciar con la aplicación se registró el conteo de las garrapatas pletóricas vivas y posteriormente se procedió con la aplicación de los tratamientos. Cada grupo de bovinos recibió tres tratamientos espaciados con 15 días, la aplicación se hizo mediante baños de aspersión con bomba de mochila manual de 20 litros, durante el periodo de octubre de 2013 a noviembre de 2016, únicamente durante la época de lluvias debido a la humedad relativa que requiere el hongo para ejercer su función fungicida sobre las garrapatas pletóricas (Bautista et al., 2016).
Después de cada aplicación se monitoreó el recuento de garrapatas, después se trasladaron al laboratorio con el apoyo de una cámara húmeda, formada por cajas Petri de plástico desechable estéril de 100x15 mm, con papel filtro estéril humedecido con agua destilada estéril en el fondo de la caja para conservar la humedad de 80% a 85%. Se sellaron con parafilm previamente esterilizado y fueron etiquetadas con el número de tratamiento y el número de identificación del bovino (Bautista et al., 2016, Pirali-Kheirabadi et al.,2016). En laboratorio se determinó el grado de patogenicidad del hongo en garrapatas adultas vivas.
Variables        
• Patogenicidad del hongo en las garrapatas. Esta variable se determinó en el Laboratorio de Biotecnología de la Escuela Maya de Estudios Agropecuarios de la Universidad Autónoma de Chiapas.
• Número de garrapatas adultas vivas en 20 cm2 de piel. Esta variable se determinó en las Unidades de Producción de Bovinos de Doble Propósito.

Diseño experimental y análisis de datos
Se utilizó el diseño de bloques completamente al azar, con cinco tratamientos y cinco repeticiones; cada tratamiento fue evaluado en una Unidad de Producción de Bovinos de Doble Propósito por separado, con el siguiente modelo:
Yij = µ + Øi + Øi(βj) + Ƭk + ØƬijk + Σijk
Donde:
Yij = variables respuesta.
µ = efecto de la media poblacional.
Øi = efecto del periodo de incubación del hongo sobre la garrapata en su fase parásita.
Øi(βj) = efecto anidado de los periodos de incubación dentro de las repeticiones.
Ƭk = efecto de las cepas evaluadas.
ØƬijk = efecto de la interacción entre el periodo de incubación y las cepas.
Σijk = error experimental asociado a las unidades experimentales.

Resultados
Caracterización de las Unidades de Producción de Bovinos de Doble Propósito
Las unidades de producción en bovinos de doble propósito se caracterizaron por tener productores en una edad de 52 años y un grado escolar de 6.53 años; su sistema de producción de ganado bovino tiene un doble propósito: la producción de leche para el consumo familiar y la comercialización local y regional; 40% destina su producción a la comercialización a nivel local, abasteciendo a pequeños transformadores, quienes agregan valor mediante la transformación a queso, distribución que puede llegar a ser regional; el restante 60% de los productores comercializa directamente a la empresa transnacional Nestlé, cuenta con un promedio de 16.95 hectáreas por productor e implementan su sistema de producción por medio de pastoreo extensivo con rotación de potreros, por lo que dependen en gran medida del forraje que haya para alimentar a su hato. La mayoría de las hectáreas se destina a la ganadería y la agricultura, y muy pocas a acahual. La primera es la que mayor superficie ocupa: 16.95 ha, la segunda ocupa 1.26 ha y la tercera 0.03 ha. La leñosa forrajera que más predominó es el Guasimo (Guazuma ulmifolia) con 6.45%, la gramínea que más predominó es la Grama natural (Paspalum notatum) con 35.8%, aunque también cuentan con otras especies, por ejemplo, la estrella de áfrica (Cynodon nlemfuensis), la insurgente (Brachiaria brizantha) y el pasto señal (Brachiaria decumbens); el tamaño de la explotación ganadera es de 43.4 en términos de unidad animal (UA), la raza bovina predominante es la cruza Cebú/Suizo con 64.05%, y la carga animal expresada en unidad animal por hectárea se considera elevada con 2.99 UA/ha. Aunado a ello, 61.3% de los productores identifica a sus praderas como medianamente empastadas y 17.4% menciona que se encuentran en condiciones de sobrepastoreo; el excesivo número de unidades animales por hectárea ha generado como consecuencia la renta de pastizales, actividad que realiza 32% de los productores, con un estimado de 3.54 ha cada uno. Otra actividad importante es el manejo del hato ganadero, específicamente con respecto al grado de control de enfermedades 40.3% de los productores depende de insumos externos en 68.5%, lo cual indica que están adquiriendo insumos necesarios para realizar sus actividades básicas de producción; la mortalidad en crías no fue elevada, ya que obtuvieron en este indicador 10.1% tomando en cuenta las condiciones de la región. Con respecto al área reproductiva hubo un elevado número de vacas por semental con 25.1 hembras; la época de partos más propicia es durante los meses de abril-mayo y los becerros se destetan a los seis meses de edad con un peso aproximado de 120kg destinados a la engorda y los sementales se reemplazan a los cuatro y cinco años. En cuanto al alojamiento y las instalaciones, 53.5% cuenta con las instalaciones básicas: corrales, bodegas, comederos, bebederos, etcétera. Solo 49.9% de los productores cuenta con los servicios básicos tales como caminos, energía eléctrica y agua entubada. La falta de instalaciones e infraestructura adecuadas da como resultado que se utilice muy poco equipo mecanizado con 5.72%, en contraste con el nivel de uso de equipo manual con 86%.

Ensayos en campo
A continuación, seresentan los resultados de la evaluación de los hongos entomopatógenos de Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana, para el control de la garrapata Rhicephalus (Boophilus) microplus en estado adulto, en unidades de producción en bovinos de doble propósito, municipios de Emiliano Zapata, Tabasco y la Cuenca Lechera de Catazajá, Chiapas.

Tabla 1. Evaluación de los hongos entomopatógenos Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana, para el control de la garrapata Rhicephalus (Boophilus) microplus en estado adulto, en Unidades de Producción Pecuaria, en Emiliano Zapata, Tabasco y la Cuenca Lechera de Catazajá, Chiapas, México.

Cuadro 1. n.a, no aplica
Fuente: elaboración propia.

Como se puede observar en el Tabla 1, los diferentes tratamientos evaluados en este estudio tuvieron un efecto de hasta 76.6% de patogenicidad en garrapatas en estado adulto con la cepa Beauveria bassiana 1.3X1012 conidias/ml y un rango de 37.75% de patogenicidad en garrapatas con la cepa de Metarhizium anisopliae 1.3x1012 conidias/ml.
Por otra parte, la Figura 1 muestra el comportamiento de cada uno de los tratamientos efectuados y el número promedio de garrapatas por animal antes y después de la aplicación.

Figura 1. Evaluación de los hongos entomopatógenos de Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana, para el control de la garrapata Ricephalus (Boophilus) microplus en estado adulto, comparando el número de garrapatas vivas antes de la aplicación del tratamiento frente al número de garrapatas vivas a 15 días post aplicación.

Fuente: elaboración propia.

En la Figura 1 se puede observar que el número de garrapatas vivas antes de la aplicación del tratamiento frente al número de garrapatas vivas a 15 días de la aplicación, con la dosis de la cepa nativa MM01 de Metarhizium anisopliae 1X10⁸ conidias/ml, suma un promedio de 56.6 garrapatas vivas por animal antes de la aplicación, y de 12.2 garrapatas en promedio por animal a 15 días de la aplicación; en la cepa comercial de Metarhizium anisopliae 1.3X1012 conidias/ml se encontró un promedio de 68.2 garrapatas vivas por animal antes de la aplicación y de 12.4 garrapatas vivas en promedio por animal a 15 días de la aplicación; en la cepa comercial de Beauveria bassiana 1.3X1012 conidias/ml se encontró un promedio de 26.4 garrapatas vivas por animal antes de la aplicación y de 8.6 garrapatas en promedio por animal a 15 días de la aplicación; en el tratamiento con AmitrazMR a la dosis de 2 ml L-1 se encontró un promedio de 58.8 garrapatas por animal antes de la aplicación y de 46.6 garrapatas en promedio por animal a 15 días de la aplicación; en el tratamiento testigo sin aplicación se encontró un promedio de 34.4 garrapatas por animal antes de la aplicación de solamente agua y de 62.2 garrapatas en promedio por animal a 15 días de la aplicación de agua, a cantidades iguales que en los tratamientos anteriores.
Los porcentajes más altos de mortalidad en garrapatas por animal se presenta en la cepa comercial de Metarhizium anisopliae 1.3X1012 conidias/ml, después en la cepa nativa de MM01 Metarhizium anisopliae 1X10⁸ conidias/ml y, por último, en la cepa comercial de Beauveria bassiana 1.3X1012. En el tratamiento con AmitrazMR a la dosis de 2 ml L-1, se observa que con el tratamiento de la cepa nativa de Metarhizium anisopliae 1X10⁸ conidias/ml disminuyó el número de garrapatas promedio por animal de 44.4 (78.45%) de mortalidad, el tratamiento con la cepa comercial de Metarhizium anisopliae 1.3X1012 conidias/ml disminuyó el número de garrapatas promedio por animal de 55.8 (81.82%) de mortalidad; el tratamiento con la cepa comercial de Beauveria bassiana 1.3X1012 conidias/ml disminuyó el número de garrapatas promedio por animal de 17.8 (67.42%) y el número de garrapatas promedio por animal de 12.2 (20.75%) de mortalidad, mientras que el tratamiento testigo sin aplicación incrementó el número de garrapatas promedio por animal de 27.8 (80.81%).

Patogenicidad
El efecto de patogenicidad de la cepa comercial de Beauveria bassiana fue mayor en comparación con los hongos entomopatógenos de las cepas nativas MM01 y comercial de Metarhizium anisopliae.

Figura 2. Patogenicidad de los hongos entomopatógenos de Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana para el control de la garrapata Ricephalus (Boophilus) microplus, en el municipio de Emiliano Zapata, Tabasco y en la Cuenca Lechera de Catazajá, Chiapas, México.

Fuente: elaboración propia.

Como se puede observar en la Figura 2, con el tratamiento de la cepa nativa MM01 de Metarhizium anisopliae 1X108 conidias/ml se presentó un porcentaje de patogenicidad de 47.71% a los 10 días de haber sido inoculada en la garrapata, en comparación con la cepa comercial de Metarhizium anisopliae 1.3X1012 conidias/ml, que mostró 37.75% de patogenicidad a los 44.5 días de haber sido inoculada en la garrapata, mientras que la cepa comercial de Beauveria bassiana 1.3X1012 obtuvo 76.66% de patogenicidad a los 37.3 días de haber sido inoculada en la garrapata.

Figura 3. Efecto binomial de los hongos entomopatógenos para el control de la garrapata en estado adulto.

Fuente: elaboración propia.

En la Figura 3 se observa que el efecto binomial fue negativo y que existe una interacción entre tratamiento y tiempo, es decir, mientras mayor sea el número de días transcurridos después de la inoculación de los hongos entomopatógenos, el efecto de mortalidad de garrapatas disminuye en comparación con el testigo. Por tanto, el análisis estadístico mostró una diferencia altamente significativa con el factor tiempo en cuanto a datos de la chi cuadrada de 66.810 con una probabilidad de 0.001% de significancia.

Discusión
Los hongos entomopatógenos han demostrado tener gran potencial para el control biológico de Rhicephalus (Boophilus) microplus (Ojeda-Chi et al., 2011; Fernandes et al., 2012). En condiciones de campo, la patogenicidad puede estar afectada por factores macroclimáticos tales como temperatura, humedad y radiación solar, así como factores microclimáticos, como secreciones químicas de la piel del animal, microflora y temperatura de la piel, los cuales contribuyen a elevar el nivel de infección de los hongos entomopatógenos (germinación y penetración) (Fernandes y Bittencourt, 2008; Leemon y Jonsson, 2008; Dantigny y Nanguy, 2009).
Pérez J. (2007) asegura que la mortalidad ocasionada a Boophilus microplus por Beauveria bassiana (59.19 %) en condiciones de laboratorio es el resultado de la cepa comercial de Beauveria bassiana 1.3X1012 conidias/ml, con 67.42 % en condiciones de campo, con aplicaciones repetidas cada 15 días, en horas de baja radiación solar (07:00-08:00); este porcentaje de mortalidad disminuyó con el paso de los días debido a que había una interacción entre el ambiente, las garrapatas del animal y los hongos, que condiciona la efectividad de estos últimos. Asimismo, Polar et al. (2005) evaluaron el efecto de la radiación solar sobre la temperatura corporal en relación con la sobrevivencia de las esporas de Metarhizium anisopliae, reportando que las áreas del cuerpo expuestas a la radiación solar con temperaturas mayores a los 35-40°C mostraban menor eficacia del hongo, en comparación con temperaturas menores a los 30-35°C, en las que Metarhizium anisopliae se adhiere, penetra y germina en las garrapatas en las primeras 24 horas después del tratamiento. Aplicar los tratamientos en horas de baja radiación solar pudo haber favorecido la buena eficacia de los hongos para el control in vivo de Rhicephalus (Boophilus) microplus. Por su parte, Arguetas et al. (2008) evaluaron la eficacia del hongo entomopatógeno Metharrizium anisopliae en el control de Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) y reportaron el control de poblaciones de Ricephalus (Boophilus) microplus al asperjar conidios de Metarhizium anisopliae 1X1010 conidias/ml sobre el ganado en condiciones de campo, lo que presenta una disminución de garrapatas adultas en 79% y Kaaya G.P et al. (2011) a una concentración de 1X108 conidias/ml en 83%.
La eficiencia del uso del AmitrazMR a la dosis de 2 ml L-1 demostró en el presente estudio un porcentaje de mortalidad de 20.75%, resultados que no coinciden con los de Arguetas et al. (2008), ya que estos últimos reportaron el control de poblaciones de Ricephalus (Boophilus) mediante el uso de AmitrazMR como tratamiento control, el cual presenta una disminución de garrapatas adultas en 59%. Posiblemente las condiciones climatológicas entre ambos estudios fueron diferentes.
Las cepas de Metarhizium anisopliae en dosis nativa de 1X108, la comercial en dosis de 1.3X1012 y la cepa comercial de Beauveria bassiana 1.3X1012 disminuyeron la infestación de garrapatas en los animales. Dicho efecto controlador de estos hongos entomopatógenos sobre las garrapatas se conservó en los animales tratados durante dos semanas después de la última aplicación, resultados similares fueron observados por Kaaya et al. (1996), para quienes el efecto de las conidias de los hongos de Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae persistieron entre una y tres semanas en las orejas de los animales después de la aplicación.
Alonso-Díaz et al. (2007), en su trabajo de investigación evaluación de Metarhizium anisopliae (Hyphomycetes) para el control de Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) en infestaciones naturales en el trópico mexicano, reportaron eficacia de 40 a 91% empleando la cepa Ma34 de Metarhizium anisopliae sobre bovinos infestados con garrapatas adultas de Rhicephalus (Boophilus) microplus, lo cual coincide con lo reportado por este estudio donde el rango fue de 37.33 a 44.5% de patogenicidad. Esto tal vez pudo favorecer al animal debido a las condiciones macro y microclimáticas (Edmundo Cabrera, 2013); sin embargo, en los potreros donde pastaron los animales tratados, después de 20 días del periodo de ocupación pastaron otros que no fueron tratados, los cuales presentaron menor infestación de garrapatas, esto comprueba la dispersión de las esporas mencionada por Bautista et al. (2012).
Polar et al. (2005), en la investigación sobre las características termales de Metarhizium anisopliae aislamientos importantes para el desarrollo de plaguicidas biológicos para el control de garrapatas, reportaron eficacias de < 50% a concentraciones de 1 X 108 conidias/ml en ganado estabulado bajo infestaciones naturales, lo cual coincide con los resultados de este estudio a la misma concentración 1 X 108 conidias/ml de Metarhizium anisopliae, solamente que en condiciones de libre pastoreo.
Leemon et al. (2008) evaluaron la eficacia de Metarhizium anisopliae en condiciones de laboratorio y campo sobre bovinos; dichos autores reportaron baja mortalidad de garrapatas sobre los animales en comparación con la mortalidad obtenida en condiciones de laboratorio, debido a que los factores microclimáticos de los animales afectan negativamente a las esporas que inoculan sobre las garrapatas durante el proceso de aspersión. Los resultados obtenidos por ellos coinciden con lo encontrado en el presente estudio, donde la eficacia de los hongos entomopatógenos utilizados no alcanzó 90-100% como sucedió previamente en condiciones de laboratorio (Ojeda-Chi et al.,2010).

Romo-Martínez et al. (2013), en la investigación evaluación de productos de origen natural para el control de Rhicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) en bovinos infestados artificialmente, demostraron la eficacia del hongo sobre Rhicephalus (Boophilus) microplus al disminuir la cantidad de larvas, ninfas y adultas de esta garrapata, desde los 7 a los 21 días de la inoculación fúngica. Estos estudios coinciden con el presente, respecto a la eficacia de la cepa MM01 de Metarhizium anisopliae a la concentración 1X108, pero no así con las cepas comerciales de Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana a la concentración 1.3 X 1012, lo cual varía dependiendo de la cepa y la concentración utilizada. Según Frazzon et al. (2000), Kirkland et al. (2004) y R.A. Campos, et al. (2010), esta diferencia en la eficacia depende de la capacidad de la cepa del hongo para penetrar la cutícula de la garrapata, usando una combinación de mecanismos enzimáticos y físicos. No obstante, aunque se cuenta con un considerable volumen de información sobre estudios realizados con Metarhizium anisopliae para el control de garrapatas Ricephalus (Boophilus) microplus, no ocurre lo mismo para el hongo de Beauveria bassiana, del cual, a excepción del trabajo publicado por Ren et al. (2011), donde evalúa la virulencia de varias cepas chinas de este hongo, se cuenta con poca información específica publicada para el control de garrapatas Ricephalus (Boophilus) microplus.
Conclusiones
El uso de los hongos entomopatógenos es una alternativa para el control de garrapatas en estado adulto en las región XIII Maya de Chiapas y región Ríos del estado de Tabasco, México.
Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana son patogenicos en estado adulto de garrapatas Ricephalus (Boophilus) microplus.
Agradecimientos
A los productores en general de las comunidades de Agua Fría, Punta Arena del municipio de Catazajá, de la región XIII Maya en Chiapas y del municipio de Emiliano Zapata, región de los Ríos en Tabasco. Agradecemos de manera especial a los señores Edmundo Cabrera Fonz, Adelor Gutiérrez Vicente, Alejandro Ramírez Gutiérrez, Elver Sánchez y Rafael Ramírez Pech por facilitar sus Unidades de Producción Pecuaria, así como a a la Fundación Produce Tabasco en el 2014, por el financiamiento otorgado y que permitió realizar la presente investigación.

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